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    病毒滅活試驗步驟是怎樣的?

    更新時間:2022-12-07      點擊次數:878
      病毒滅活試驗是用細胞感染法測定消毒因子作用前后(或對照組與實驗組)樣本中病毒的量。以細胞病變作為判斷指標,確定各組病毒的感染滴度,觀察消毒因子對病毒的滅活效果。那么這個試驗步驟是怎樣的?
     
      

    病毒滅活試驗
     

     

      1、懸液法病毒滅活試驗
      
     ?。?)取待測消毒劑,用滅菌硬水稀釋至所需濃度的1.25倍,于20℃±1℃水浴中備用。
      
     ?。?)病毒懸液的制備:取出-80℃低溫保存的病毒,室溫解凍后,與有機干擾物按照1:1比例混合作為消毒劑滅活試驗用病毒懸液。
      
     ?。?)消毒試驗:取上述病毒懸液1份加入4份待檢消毒劑,立即混勻并記時。作用至規定時間,立即取出0.1mL,加入經鑒定合格的0.9mL中和劑中混勻;或用經鑒定合格的除藥方法處理。
      
     ?。?)對照組試驗:陽性對照組為病毒對照組,觀察病毒生長是否良好,病毒滴度是否達到試驗要求;陰性對照組用細胞維持液作為陰性對照,觀察有無污染,細胞生長是否良好。
      
     ?。?)以上各組按照終點稀釋法分別進行病毒滴度測定。試驗重復3次。
      
     ?。?)終點稀釋法:用細胞維持液對待滴定樣本做10倍系列稀釋,吸取樣液100μL,接種于單層細胞培養板上,每個滴度接種4孔。在36℃±1℃放置1h~2h后,取出培養板,更換細胞維持液。繼續放入二氧化碳培養箱中(36℃±1℃,5%±1%二氧化碳)培養3-4天,顯微鏡下觀察細胞生長狀態,記錄細胞病變情況。
      
      2、載體法病毒滅活試驗
      
     ?。?)取待測消毒劑,置于20℃±1℃水浴中備用。
      
     ?。?)病毒載體的制備:取滅菌載體片,滴染病毒晾干備用。
      
     ?。?)消毒試驗:取病毒載體置于消毒因子,作用至規定的時間后取出放入經鑒定合格的中和劑或洗脫液1.0mL中,作用10min,混勻洗脫。消毒器械載體布點應置于殺滅部位,具體方法參照《消毒技術規范》。
      
     ?。?)對照組試驗:陽性對照組為病毒對照組,觀察病毒生長是否良好,病毒滴度是否達到試驗要求;陰性對照組用細胞維持液作為陰性對照,觀察有無污染,細胞生長是否良好。
      
     ?。?)以上各組按照終點稀釋法分別進行病毒滴度測定。試驗重復3次。
      
     ?。?)終點稀釋法:用細胞維持液對待滴定樣本做10倍系列稀釋,吸取樣液100μL,接種于單層細胞培養板上,每個滴度接種4孔。在36℃±1℃放置1h~2h后,取出培養板,更換細胞維持液。繼續二氧化碳培養箱中(36℃±1℃,5%±1%二氧化碳)培養3-4天,顯微鏡下觀察細胞生長狀態,記錄細胞病變情況。
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